Kromatografi lajur ialah teknik yang digunakan untuk memisahkan dan menulenkan sebatian berdasarkan kekutuban dan interaksinya dengan fasa pegun dan mudah alih. Berikut ialah panduan langkah demi langkah untuk menyediakan dan menjalankan kromatografi lajur:
Bahan yang Diperlukan:
Lajur: Lajur kaca atau plastik dengan stopcock.
Fasa pegun: Gel silika atau alumina (penjerap).
Fasa mudah alih: Campuran pelarut atau pelarut (eluen).
Sampel: Campuran yang akan diasingkan.
Bahan pembungkusan (pilihan): Kapas atau bulu kaca.
Bikar atau vial pengumpulan: Untuk mengumpul pecahan eluen.
Peralatan: Pengapit dan dirian, pipet, corong, spatula.
Langkah-langkah untuk Menyediakan Kromatografi Lajur:
Pilih Penjerap:
Pilih gel silika atau alumina bergantung pada kekutuban sebatian yang akan diasingkan.
Saiz zarah penjerap (40–63 µm) mempengaruhi kecekapan pengasingan.
Sediakan Lajur:
Palamkan bahagian bawah lajur dengan kapas atau bulu kaca untuk mengelakkan penjerap daripada bocor.
Kepit lajur secara menegak pada dirian dengan penutup randik.
Pembungkusan Basah (Diutamakan untuk Hasil Terbaik):
Tambahkan sedikit pelarut (fasa mudah alih) pada lajur.
Sediakan buburan penjerap dalam pelarut (gunakan 1.5-2 kali jumlah penjerap lajur).
Tuangkan buburan perlahan-lahan ke dalam lajur menggunakan corong.
Benarkan penjerap mendap dengan mengetik perlahan-lahan lajur atau biarkan ia berehat.
Buka stopcock sebentar untuk mengalirkan lebihan pelarut sehingga penjerap membentuk katil padat dan rata.
Pembungkusan Kering (Kaedah Alternatif):
Tambah penjerap kering terus ke dalam lajur.
Ketik lajur perlahan-lahan untuk memastikan pembungkusan sekata.
Berhati-hati menambah pelarut di sepanjang dinding lajur untuk mengelakkan mengganggu penjerap yang dibungkus.
Keadaan Lajur:
Setelah dibungkus, pra-elusi lajur dengan pelarut untuk mengeluarkan poket udara dan menyeimbangkan penjerap.
Muatkan Sampel:
Larutkan sampel dalam sejumlah kecil fasa mudah alih.
Sapukan sampel perlahan-lahan di atas penjerap yang dibungkus menggunakan pipet atau picagari.
Benarkan sampel menjerap ke dalam fasa pegun.
Tambah Fasa Mudah Alih:
Berhati-hati menambah pelarut ke bahagian atas lajur tanpa mengganggu katil penjerap.
Buka kok randik untuk memulakan elusi, mengekalkan kadar aliran yang stabil.
Kumpulkan Pecahan:
Kumpulkan pelarut terlarut dalam pecahan berjujukan menggunakan tabung uji atau botol.
Pantau pecahan menggunakan cahaya UV, TLC (kromatografi lapisan nipis), atau kaedah analisis lain.
Optimumkan Sistem Pelarut:
Mulakan dengan pelarut tunggal atau pelarut kekutuban rendah.
Tingkatkan kekutuban secara beransur-ansur jika sebatian tidak mencair.
Petua untuk Kejayaan:
Elakkan Buih Udara: Pastikan katil penjerap dibungkus dengan ketat dan sekata.
Mengekalkan Kadar Aliran: Kadar aliran yang stabil dan sederhana memberikan pengasingan yang lebih baik.
Elusi Kecerunan: Gunakan campuran pelarut dengan kekutuban yang meningkat secara beransur-ansur untuk resolusi yang lebih baik.
Pantau Kemajuan: Gunakan TLC untuk menyemak pemisahan dan mengenal pasti pecahan.
Dengan mengikuti langkah-langkah ini, anda boleh memisahkan dan memurnikan sebatian anda dengan berkesan menggunakan kromatografi lajur.